Análisis de expresión génica por qPCR (RT-qPCR)
Desarrollamos y ejecutamos ensayos de RT-qPCR para la cuantificación de expresión génica, biomarcadores y transgenes, generando datos sensibles y reproducibles para estudios preclínicos, clínicos y bioanalíticos.
- Expresión génica y biomarcadores
- Cuantificación de transgenes y vectores virales
- Desarrollo y validación de métodos
- Soporte regulatorio
Ofrecemos soluciones de biología molecular adaptadas a cada producto, plataforma y objetivo del estudio, permitiendo cuantificar señales génicas relevantes en distintas matrices biológicas mediante estrategias robustas y altamente sensibles.
Trabajamos desde el diseño del método y la selección de controles hasta el análisis e interpretación de resultados, aportando herramientas útiles para estudios de respuesta biológica, terapias avanzadas y control analítico.
Aplicamos estas capacidades a la cuantificación de biomarcadores, transgenes y vectores virales, con métodos adaptados a cada producto y soporte analítico útil para desarrollo, caracterización y control en plataformas biológicas complejas.
¿Qué es la expresión génica por qPCR?
La qPCR (PCR cuantitativa en tiempo real) es una técnica basada en la amplificación enzimática de ácidos nucleicos y su detección en tiempo real, permitiendo la cuantificación precisa del ARN tras su conversión a cDNA.
Este enfoque permite evaluar cambios en la expresión génica asociados a:
- Respuesta a fármacos
- Procesos inflamatorios e inmunitarios
- Biomarcadores de eficacia o toxicidad
El desafío en los estudios de expresión génica
Si estos factores no se controlan adecuadamente, pueden comprometer la interpretación biológica de los resultados. La medición de expresión génica presenta retos técnicos críticos:
- Degradación del ARN
- Variabilidad en la retrotranscripción
- Diferencias entre matrices biológicas
- Eficiencia de amplificación
Nuestra solución: RT-qPCR de alta precisión
En Netpharmalab implementamos ensayos de RT-qPCR en formato:
- SYBR Green
- Sondas específicas (TaqMan®)
Garantizando máxima calidad mediante:
- Extracción estandarizada de ARN
- Uso de genes de referencia (housekeeping genes)
- Validación de eficiencia de amplificación
- Normalización mediante ΔCt, ΔΔCt o cuantificación absoluta
Aplicaciones principales
- Validación de biomarcadores de respuesta y toxicidad
- Estudios de respuesta inmune e inflamatoria
- Cuantificación de transgenes y vectores virales
- Evaluación de expresión inducida por fármacos
- Estudios de estabilidad y potencia biológica
- Soporte a estudios PK/PD y correlación con ADA/NAb
¿Qué incluye nuestro servicio?
- Cuantificación de ARN mensajero (mRNA)
- Análisis de biomarcadores génicos
- Estudios de expresión en múltiples matrices
- Métodos personalizados según el estudio
- Resultados cuantitativos y reproducibles
Metodología RT-qPCR
- Extracción de ARN
Desde plasma, suero, tejidos, cultivos celulares o productos biológicos - Síntesis de cDNA
Retrotranscripción mediante random primers u oligo-dT - Amplificación en tiempo real
Uso de SYBR Green o sondas TaqMan® - Cuantificación
– Curvas estándar
– ΔCt / ΔΔCt
– Cuantificación absoluta - Controles de calidad
– No-RT
– No-template
– Genes housekeeping (GAPDH, ACTB, etc.)
Fases del ensayo
- Diseño / transferencia del método
- Cualificación y validación analítica
- Procesamiento de muestras
- Análisis de datos y reporte
Incluyendo evaluación de:
- Linealidad
- Precisión
- Reproducibilidad
- Límite de detección
Cumplimiento regulatorio
Con SOPs completas y trazabilidad en todas las etapas del proceso, nuestros ensayos cumplen con:
- EMA (European Medicines Agency)
- FDA (Food and Drug Administration)
- ICH Q2(R2)
- 21 CFR Part 11 (integridad de datos)
Preguntas frecuentes (FAQ)
- ¿Qué tipo de muestras se pueden analizar?: Plasma, suero, tejidos, cultivos celulares y productos biológicos.
- ¿Qué diferencia hay entre SYBR Green y TaqMan®?: SYBR Green detecta ADN de forma general, mientras que TaqMan® ofrece mayor especificidad mediante sondas.
- ¿Qué es la normalización ΔCt o ΔΔCt?: Son métodos para comparar niveles de expresión génica ajustando los resultados frente a genes de referencia.
- ¿Se pueden cuantificar transgenes o vectores virales?: Sí, la qPCR es una herramienta clave para la cuantificación precisa de material genético.
- ¿Estos ensayos son válidos para estudios regulatorios?: Sí, siempre que estén desarrollados y validados según EMA, FDA e ICH.
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